«Delvotest®Т» — стандартный диффузионный тест на определение остаточного количества антибактериальных веществ (антибиотиков и сульфаниламидов) в молоке. Тест состоит из ампул или планшетов (96 лунок), содержащих твердую агарную среду со стандартизированным числом спор микроорганизмов Bacillus stearothermophilus var. calidolactis вместе с необходимыми нутриентами для роста и антифолатом триметопримом. Среда окрашивается фиолетовым индикатором рН бромкрезоловым фиолетовым. Образцы молока, которые не содержат антибактериальных веществ, или их содержание ниже установленного уровня, при добавления в тест в размере 0.1 мл и инкубации при 64 °C показывают развитие и активный рост микроорганизмов. Это приводит к изменению цвета индикатора инкубатора. Когда образец молока содержит антибактериальные вещества согласно уровню чувствительности теста, рост микроорганизмов подавляется, и, как результат, цвет остается преимущественно фиолетовым.
Чувствительность в контрольное время с молоком без ингибирующих:
|
Антибиотики |
Концентрация |
Наблюдаемый цвет |
|
Пенициллин С |
1 РРЬ |
От желтого к желто-фиолетовому |
|
|
4 ррЬ |
Фиолетовый |
|
Сульфадиазин |
100 ррЬ |
Преимущественно фиолетовый |
|
Окситетрациклин |
100 ррЬ |
Преимущественно фиолетовый |
Контрольное время определяется как время инкубации, необходимое для того, чтобы цвет теста менялся от фиолетового до желтого с использованием молока без ингибирующих веществ.
Длительность теста при контрольном времени составляет 3 часа при 64 °C +/- 2 °C.
Если контрольное время не используется, DSM рекомендует фиксированное время считывания (считывание результатов теста без эталонного образца- молока без ингибирующих веществ). Фиксированное время считывания составляет 3 часа 15 минут при 64 °C +/- 2°С
| Класс антибиотика | Антибиотик | Ампульный тест | Класс антибиотика | Антибиотик | Ампульный тест | |||
| CCß (ppb) | мг/кг | |||||||
| CCß (ppb) | мг/кг | |||||||
| Пенициллины | Амоксициллин | 4 | 0,004 | Аминоглюкозиды | Неомицин | 60 | 0,06 | |
| Ампициллин | 4 | 0,004 | Гентамицин | 65 | 0,065 | |||
| Пенициллин G | 2 | 0,002 | Канамицин | 1010 | 1,01 | |||
| Клоксациллин | 6 | 0,006 | Стрептомицин | 400 | 0,4 | |||
| Оксациллин | 30 | 0,03 | DH Стрептомицин | 800 | 0,8 | |||
| Тетрациклины | Окситетрациклин | 100 | 0,1 | Спектиномицин | 2010 | 2,01 | ||
| Хлортетрациклин | 150 | 0,15 | Цефалоспорины | Цефапирин | 6 | 0,006 | ||
| Тетрациклин | 70 | 0,07 | Цефтиофур | 20 | 0,02 | |||
| Доксициклин | (0) | 0 | Цефоперазон | 40 | 0,04 | |||
| Сульфонамиды | Сульфаметазин | 135 | 0,135 | Цефалексин | 30 | 0,03 | ||
| Сульфатиазол | 40 | 0,04 | Цефхином | 40 | 0,04 | |||
| Сульфадиметоксин | 40 | 0,04 | Другие | Линкомицин | 120 | 0,12 | ||
| Сульфадиазин | 40 | 0,04 | Хлорамфеникол | 4100 | 4,1 | |||
| Макролиды | Тилмикозин | 60 | 0,06 | Триметоприм | 110 | 0,11 | ||
| Тилозин | 35 | 0,035 | Рифамиксин | 40 | 0,04 | |||
| Эритромицин | 160 | 0,16 | Дапсон | 30 | 0,03 | |||
Осторожно
- Ввиду крайней чувствительности данного теста к противомикробным веществам (антибиотикам, компонентам вакцин и прочим компонентам, таким как дезинфицирующие средства, моющие средства
и т. д. ), необходимо предотвращать загрязнение этими веществами. Вымыть и высушить руки перед началом процедуры испытания. Использовать чистый стол. - Соблюдать осторожность при обращении с тестом, во избежание повреждения твердой агаровой среды, что может пагубно отразиться на качестве окрашивания теста при определении результата.
Чувствительность обнаружения и селективность
Наилучшую чувствительность теста достигают при измерении через контрольное время. Чтобы определить контрольное время: в качестве отрицательного контроля в первую ампулу / лунку пипеткой перенести 0,1 мл молока, не содержащего антибактериальных веществ. Определить полученный цвет образца молока для отрицательного контроля (первая ампула / лунка) по истечении времени инкубации, которое составляет 2 часа 45 минут. Если цвет не стал желтым, сразу же вернуть тесты в устройство для инкубации до достижения отрицательным контролем желтого цвета хотя бы частично (рекомендуется повторять определение с интервалом в 5 минут). Когда цвет отрицательного контроля станет желтым, можно проводить считывание всех остальных ампул (образцы). В контрольный момент времени чувствительность Delvotest®Т составляет 4 ррb для пенициллина G, 100 рpb для сульфадиазина и 100 ррb для окситетрациклина.
Если определение не проводится в контрольный момент времени, для коровьего молока можно проводить определение через 3 часа 15 минут, но это снизит чувствительность. Для оптимального результата компанией «ДСМ» рекомендуется проводить проверку правильной работы теста, процедур и инкубации с помощью образцов молока отрицательного и положительного контроля.
Инструкции
- Предварительно нагреть устройство для инкубации — температура сухого инкубатора, водяной бани или Delvotest® Ассеlerator Smart должна составлять 64 °C (± 2,0 °С).
- Выбрать необходимое количество материала для проведения теста — отсоединить одну или несколько ампул или разломать пластину на куски в зависимости от количества образцов молока для анализа. При необходимости использовать ножницы или нож. Снять алюминиевую фольгу с пластины или аккуратно сделать отверстия в фольге ампул. Проследить за тем, чтобы не повредить алюминиевую фольгу оставшихся тестов, в противном случае тесты высохнут. Сразу же вернуть оставшиеся тесты в подходящие условия хранения.
- Перенести пипеткой 0,1 мл образца в тест. Для каждого образца использовать новую чистую пипетку. Разборчиво отметить каждый тест, например, цифрами. Образцы молоко должны быть репрезентативны для анализируемого молока и однородны. При проверке молока от отдельных животных не использовать.
Хранение
Хранить тесты в оригинальной упаковке, не переворачивая, в темном месте при постоянной температуре ниже 8 °C, не допускать их замораживания (предпочтительна температура от 4 °C до 8 °С). При более низких температурах и (или) перепадах температур возможно размягчение содержимого теста, что приведет к размягчению агара или образованию пузырьков воздуха. Хранение при повышенной температуре сокращает срок годности.
